Dissertation

Publication year: 2011

ISBN: 978-3-8359-5822-7

DOI Link: https://doi.org/10.22029/jlupub-11749

Abstract: 

Die Biosynthese der Nichtstrukturproteine des Virus der Klassischen Schweinepest(KSPV) wurde hinsichtlich der Hierarchie und Dynamik der proteolytischen Reifungcharakterisiert. Dabei wurden ein wildtypisches nicht-zytopathogenes Feldvirus sowiezwei zytopathogene Konstrukte untersucht, um einen Bezug zu beschriebenen Daten vomnahe verwandten BVDV zu ermöglichen. Folgende Ergebnisse wurden dabei erzielt:1. Ein GST-NS2-3 Fusionsprotein, ein C-terminales Fragment der NS3-Helikase, einC-terminales Fragment von NS4B und das vollständige NS5A des KSPV wurdenin E. coli exprimiert und mittels Ni2+-Ionen Affinitätschromatographie gereinigt.Nach Immunisierung von Versuchstieren erfolgte die Herstellung undCharakterisierung monoklonale Antikörper (mAbs) gegen diese Proteine.2. Indirekte Immunfluoreszenz-Analysen zeigten eine enge Assoziation aller KSPVNichtstrukturproteine mit den Membranen des endoplasmatischen Retikulums. InImmunoblotanalysen eines zp KSPV Replikons und des nzp KSPV konnten dieVorläufermoleküle NS4-5 und NS2-3, die Prozessierungsintermediate NS5A/B,NS4B-5A und NS4A/B zusammen mit den reifen Nichtstrukturproteinenidentifiziert werden. Außerdem zeigte sich eine zusätzliche interne Prozessierungdes reifen NS3 zwischen der Protease- und Helikasedomäne des Moleküls.3. In nzp KSPV, zp KSPV-JIV und dem zp KSPV Replikon wurde die Prozessierungder Nichtstrukturproteine mittel Immunpräzipitation und pulse chase Analysendargestellt. Während der zp Biotyp des KSPV eine effiziente Generierung allerNichtstrukturproteine zeigt, erfolgt die Reifung dieser Proteine im nzp Biotyp nursehr langsam. Zum Vergleich der Biotypen wurden die Halbwertszeiten derVorläufermoleküle und reifen Produkte bestimmt. In diesen Analysen erwiesensich die reifen Proteine des KSPV als stabil (T1/2: 1,5-4 h). Im zp Biotyp werdendie Vorläufermoleküle schneller umgesetzt (T1/2: 0,5-2,5 h) als die reifenNichtstrukturproteine abgebaut werden, so dass die reifen Proteine in den Zellenakkumulieren. Dagegen erzeugt die langsame Reifung der Vorläufermoleküle imnzp Biotyp (T1/2: 2,5-5,5 h) eine konstante Menge an reifen Nichtstrukturproteinenin den infizierten Zellen. Diese Daten deuten erstmals darauf hin, dass diegesteigerte Expression von NS3 im zp Biotyp eines Pestivirus die Prozessierungder anderen Nichtstrukturproteine beschleunigt. Umgekehrt beschränkt dieverminderte NS2-3 Spaltung in nzp Pestiviren die Aktivität der NS3 Protease undreguliert so die Konzentration der reifen Nichtstrukturproteine.

Harvard Citation style: Lamp, B. (2011) Charakterisierung der Nichtstrukturproteine des Virus der Klassischen Schweinepest. PhD thesis. Giessen: VVB Laufersweiler. https://doi.org/10.22029/jlupub-11749

APA Citation style: Lamp, B. (2011). Charakterisierung der Nichtstrukturproteine des Virus der Klassischen Schweinepest [Doctoral Dissertation]. VVB Laufersweiler. https://doi.org/10.22029/jlupub-11749